ICSI技術(shù)作為輔助受精的一種手段，在近10年獲得長(zhǎng)足發(fā)展。ICSI技術(shù)在動(dòng)物受精機(jī)理研究、野生動(dòng)物遺傳資源保存、拯救珍稀動(dòng)物和胚胎工廠化生產(chǎn)等方面有著非常廣闊的應(yīng)用前景。該技術(shù)已經(jīng)成為人類臨床醫(yī)學(xué)上***男性不育癥的重要手段，并在全世界得到廣泛應(yīng)用。盡管ICSI已取得很大成就，但是其存在的問(wèn)題也不容忽視。首先，由于人為地選擇，動(dòng)物自身對(duì)精子優(yōu)勝劣汰的選擇遭到破壞。這對(duì)動(dòng)物種群的發(fā)展產(chǎn)生的影響還需長(zhǎng)期深入的研究。如果能詳細(xì)了解精子的表型和基因型之間的關(guān)系，相信ICSI技術(shù)的可靠性會(huì)有所明確。其次，作為胚胎生物技術(shù)的一部分。ICSI技術(shù)也存在總體效率低的問(wèn)題，而且胚胎移植后妊娠率低而流產(chǎn)率高亦是目前存在的普遍問(wèn)題。另外，存在出生動(dòng)物的死亡和畸形等不良后果。因此要更深入地研究其機(jī)理和操作等問(wèn)題，進(jìn)一步改善ICSI技術(shù)。比如Piezo-ICSI技術(shù)就可以有效提高成功率。PMM PIEZO-ICSI的廣泛應(yīng)用將為不孕不育患者提供新的選擇，幫助他們實(shí)現(xiàn)生育愿望，重建家庭幸福。上海壓電基因重組

注射—將含一個(gè)已制動(dòng)精子的注射管輕柔刺破透明帶和卵膜，進(jìn)入卵母細(xì)胞中心。注入精子時(shí)，應(yīng)盡可能少地帶入培養(yǎng)液。之后使用負(fù)壓破壞卵膜，隨后輕柔抽吸細(xì)胞質(zhì)。精子置入、穿過(guò)卵膜和抽吸細(xì)胞質(zhì)以***卵母細(xì)胞的不同方法對(duì)受精和胚胎發(fā)育率的影響是一個(gè)研究熱點(diǎn)。壓電輔助的ICSI是一種新型方法，目前已在有ICSI結(jié)局不良病史和MⅡ期卵母細(xì)胞有限的患者中使用。在ICSI操作過(guò)程中，該技術(shù)對(duì)卵母細(xì)胞的損傷較小且可改善受精率和胚胎質(zhì)量。目前使用壓電驅(qū)動(dòng)管的新型ICSI注射技術(shù)已成功用于多種哺乳動(dòng)物。由于該注射器采用超聲切割力(而不是刺穿力)穿透卵膜，注射過(guò)程中卵母細(xì)胞幾乎沒(méi)有變形，因此其對(duì)卵母細(xì)胞的損傷大幅減少。該技術(shù)實(shí)現(xiàn)的存活率和成功率同樣高。注射后，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室方案培養(yǎng)卵母細(xì)胞。受精I(xiàn)CSI后，受精率為50%-80%。雖然ICSI不可保證一定受精，但完全受精失敗的發(fā)生率較低，通常發(fā)生于獲卵數(shù)較低的周期。受精失敗的原因通常不是未置入精子或卵母細(xì)胞排出精子。其可能是由于卵母細(xì)胞***失敗，這通常與卵母細(xì)胞質(zhì)量較差或精子無(wú)活性有關(guān)。上海精子制動(dòng)壓電活檢與傳統(tǒng)ICSI方法相比，Piezo-ICSI增加了顯微注射的速度和準(zhǔn)確率，利用MII轉(zhuǎn)基因的方法有效的生成轉(zhuǎn)基因鼠。

以piezo操作系統(tǒng)為技術(shù)支撐，在掌握小鼠卵母細(xì)胞胞漿內(nèi)精子注射技術(shù)(ICSI)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了ICSI技術(shù)生產(chǎn)試管小鼠及轉(zhuǎn)基因小鼠的嘗試。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明以Hepes-CZB+3％蔗糖做操作液，用來(lái)自成年KM鼠附睪尾的新鮮精子頭和pEGFP-N1質(zhì)粒孵育處理凍融精子頭，直接注射到B6D2F1小鼠卵母細(xì)胞質(zhì)中，注射后1h，83.3％的卵母細(xì)胞仍然存活，鮮精組和凍精組各有92.3％和83.0％成活卵子排出極體、出現(xiàn)原核。用CZB溶液繼續(xù)培養(yǎng)ICSI胚胎，兩組的卵裂率、桑椹胚率、囊胚率分別為(97.8％vs94.7％)、(64％vs64.5％)、(5％，vs24.7％)。其中桑椹胚率、囊胚率均***低于體內(nèi)受精對(duì)照組(64％，64.5％vs88％；5％，24.7％vs70％P＜0.01)；將鮮精組原核期120枚胚胎和82枚2-cell胚胎及凍精組135枚原核期胚胎移植后移植到同期km假孕母鼠受體內(nèi)，分別出生28只、3只、18只ICSI小鼠(黑色或灰色)，效率分別為23.3％，4％，13.3％。健康成年的31只ICSI小鼠，沒(méi)有明顯的生理和行為異常。隨機(jī)抽取六對(duì)鮮精組性成熟ICSI小鼠做交配實(shí)驗(yàn)，一個(gè)月后都有小鼠出生(平均窩產(chǎn)10.7只)。本實(shí)驗(yàn)表明，ICSI精子載體法可以比較高地制造小鼠轉(zhuǎn)基因胚胎，小鼠附睪新鮮精子及無(wú)抗凍劑保護(hù)冷凍致死精子都具有足夠的全程發(fā)育潛力。

“ICSI”（intracytoplasmicsperminjection）指卵胞漿單精子注射，其操作主要涉及“精子制動(dòng)-精子拾取-破膜-注射”幾個(gè)步驟，其中在“破膜”（即使用注射針刺破卵膜，以便將單個(gè)精子送入卵胞漿）這一步，部分患者的卵子會(huì)出現(xiàn)“無(wú)破膜感”這一特征，這是怎么回事呢？原來(lái)，進(jìn)行ICSI操作的時(shí)候，并不是直接用注射針徑直扎破卵膜。技術(shù)書籍這樣描述道：“調(diào)節(jié)顯微操作作針和卵膜至同一水平面，將注射針中的精子推至針尖處，注射針從卵子3點(diǎn)鐘位置穿入透明帶并繼續(xù)進(jìn)針，至卵中心或越過(guò)中心位置。由于卵膜的彈性，進(jìn)針處卵膜出現(xiàn)‘漏斗狀’，但卵膜仍未破裂，需輕微回吸注射針以確認(rèn)膜破裂。一旦刺破卵膜可見(jiàn)到胞漿和精子的一個(gè)‘快速反流’的過(guò)程或可見(jiàn)卵膜‘回彈’現(xiàn)象，之后將精子注入卵子胞質(zhì)內(nèi)。這是正常情況下的破膜操作，而文章開(kāi)頭提到的“無(wú)破膜感”，則是指注射針穿入透明帶的同時(shí)也立即穿透卵膜，不形成漏斗狀結(jié)構(gòu)，看不到胞漿的快速返流或回彈現(xiàn)象。學(xué)術(shù)界給具有這一特征的卵子細(xì)胞膜起了個(gè)特有名稱——脆性卵膜。PMM 6 MB-U-2高力度輸出型號(hào)，它可進(jìn)行克隆和ICSI等方面的許多操作。

雖然Piezo-ICSI對(duì)于大齡試管準(zhǔn)媽媽們的***來(lái)說(shuō)非常有意義，但這項(xiàng)技術(shù)的使用卻對(duì)生殖中心有著比較高的門檻。日本英**擁有三臺(tái)Piezo-ICSI儀器，儀器的顯微鏡來(lái)自日本精工企業(yè)，手動(dòng)精密操作臺(tái)來(lái)自德國(guó)。作為**精密儀器，它的每一個(gè)組件成本都達(dá)百萬(wàn)，整體造價(jià)超過(guò)千萬(wàn)。使用Piezo-ICSI不單單是設(shè)備升級(jí)，對(duì)培養(yǎng)師的操作要求和難度也是直線升級(jí)的。具體說(shuō)來(lái)，因?yàn)槭芫僮魇窃诟弑讹@微鏡下利用操作桿來(lái)進(jìn)行的，需要培養(yǎng)師同時(shí)配合操作觀察操作桿、顯微鏡、受精針和顯示屏。這么聽(tīng)起來(lái)是不是感覺(jué)難度似乎還可以？然而事實(shí)上，在操作的過(guò)程中，培養(yǎng)師需要不斷的進(jìn)行距離判斷的「切換」：想象一下，**挪動(dòng)1cm，鏡下實(shí)際只會(huì)挪動(dòng)0.1mm，但出現(xiàn)在視野中的范圍，實(shí)際上會(huì)有5cm那么大！PMM通過(guò)將精子尾部與頭部割離,精子頭部吸入平口,在中低檔能量下即可穿透透明帶,進(jìn)行單精子顯微注射。上海透明帶壓電顯微注射

PRIME TECH PMM 6可用于DNA注射。上海壓電基因重組

壓電打火機(jī)的電壓陶瓷元件產(chǎn)生的瞬間電壓用什么儀器可以測(cè)量呢？起初，我們?cè)噲D用普通指針式多用電表直流高壓擋測(cè)量，發(fā)現(xiàn)每次按動(dòng)點(diǎn)火元件的黑色塑料壓桿時(shí)，由于兩個(gè)電極接出的電壓只能使指針略微抖動(dòng)一下。分析原因是，因?yàn)殡妷好}沖持續(xù)時(shí)間甚短，指針慣性較大，指針無(wú)法同步體現(xiàn)電壓的變化做大幅偏轉(zhuǎn)。換用數(shù)字顯示型多用電表，本以為其無(wú)指針慣性影響，應(yīng)該能讀出瞬間高電壓來(lái)，誰(shuí)知事與愿違，我們根本看不到預(yù)想的高電壓讀數(shù)，只能看到一些變換不定的低電壓數(shù)據(jù)。分析起來(lái)，這是由于液晶顯示響應(yīng)速度較慢，點(diǎn)火電壓脈沖持續(xù)時(shí)間甚短，來(lái)不及顯示比較高瞬間電壓，只能顯示電壓降落（較平緩階段）過(guò)程中的某些隨機(jī)電壓讀數(shù)。***，我們搬出實(shí)驗(yàn)室的“重磅**”──示波器，再做一試。我們用的是實(shí)驗(yàn)室**普通的J2459型學(xué)生示波器，連接線為兩條普通的帶終魚夾的導(dǎo)線。從理論上講，示波器是利用電子束偏轉(zhuǎn)后打在熒光屏上顯示光點(diǎn)移動(dòng)的，電子束慣性極小，應(yīng)該能“跟蹤”上點(diǎn)火高壓脈沖的變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不出所料。上海壓電基因重組